籼稻GAD基因的克隆、序列分析及其植物表达载体构建

摘要：【目的】克隆籼稻谷氨酸脱羧酶（GAD）基因的全长eDNA，并进行序列分析和植物表达载体构建，为改良水稻的营养保健品质奠定基础。【方法】根据已知植物GAD基因的保守区域设计引物，以高GABA籼稻品系“新-9-4”的胚芽为材料，利用RT-PCR和RACE技术克隆GAD基因的全长eDNA；扩增其编码序列，构建双T-DNA植物表达载体。【结果】扩增获得长1962bp的籼稻GAD基因全长eDNA（OsiGAD），包含1479bp的开放阅读框，编码492个氨基酸。OsiGAD与已报道的水稻GAD基因OsGAD1、OsGAD2、OsGAD3的核苷酸序列同源性分别为67．1％、69．4％、98．3％，推导氨基酸序列的同源性分别为77．6％、70．1％、100．0％。OsiGAD蛋白序列具有磷酸吡哆醛结合位点和与钙调蛋白结合的c端延伸区域；构建了其具有水稻胚乳特异表达特性的双T—DNA植物高效表达载体pCDMAR—OsiGAD-hpt，选择标记基因和OsiGAD基因分别位于此载体的两个不同T—DNA区。【结论】克隆获得的籼稻GAD基因OsiGAD长1962bp，并成功构建了其双T—DNA植物高效表达载体。