类芽孢杆菌胞外胆固醇氧化酶的分离纯化

作者: 杨辉 [1] ; 吕彦茹 [1] ; 余磊 [1] ; 赵芳 [2] ; 王发合 [3] ; 李杰民 [4]

关键词: 类芽孢杆菌胆固醇氧化酶分离纯化

摘要：【目的】探讨类芽孢杆菌产生胞外胆固醇氧化酶（COD）的分离、纯化方法，为其生产和应用提供技术支持。【方法】将类芽孢杆菌发酵液通过旋转蒸发浓缩、蔗糖透析浓缩、DEAE离子交换柱层析和凝胶层析，纯化目的蛋白，然后测定获得酶的基本酶学性质。【结果】类芽孢杆菌发酵液经DEAE离子交换柱层析和sephadexG-75凝胶柱层析后，纯化所得的C01）比活力达6．83U／mg，酶活力回收为35．6％，纯化倍数为13．4倍。纯化酶经SDS—PAGE显示为均一条带，分子量约58kDa。将纯化的COD作用于不同浓度胆固醇，采用LineweaverBurk作图法，测得其Kin=3．3×10^-5mol/L。薄层层析结果显示，产物为胆甾-4-烯-3-酮，说明纯化所得酶是COD。【结论】纯化获得电泳纯类的芽孢杆菌胞外c0D，其与底物亲和力较强，具有潜在的应用研究价值。

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类芽孢杆菌胞外胆固醇氧化酶的分离纯化

作者: 杨辉 [1] ; 吕彦茹 [1] ; 余磊 [1] ; 赵芳 [2] ; 王发合 [3] ; 李杰民 [4]

关键词: 类芽孢杆菌 胆固醇氧化酶 分离 纯化

关键词: 类芽孢杆菌胆固醇氧化酶分离纯化