广西巴马小型猪CTGF基因真核表达载体构建及其相关生物信息学分析

作者:黄叶吴延军朱思燃奉玲丽瞿秋红江雨航夏琴崔悦悦莫家远兰干球

关键词: 广西巴马小型猪; CTGF基因; 小鼠Hep3B细胞; 脂质体转染; 生物信息学;

摘要：【目的】构建广西巴马小型猪结缔组织生长因子（CTGF）基因真核表达载体并鉴定其活性,为深入研究CTGF在癌症发生中的作用及其分子机制提供参考,也为构建CTGF转基因广西巴马小型猪及研发基于CTGF的癌症基因治疗策略提供理论依据。【方法】利用RT-PCR从广西巴马小型猪肝脏组织中克隆CTGF基因,并将CTGF基因亚克隆到p DsRed-N1载体上,然后通过脂质体转染小鼠Hep3B细胞,转染48 h后于荧光显微镜下观察细胞是否表达红色荧光蛋白,同时利用在线生物信息学软件对其理化性质进行分析。【结果】成功克隆获得广西巴马小型猪CTGF基因编码区（CDS）序列,序列全长1050 bp,共编码349个氨基酸,与NCBI上已公布普通猪参考序列的同源性为99.5%,有5处碱基突变,且均为同义突变。将广西巴马小型猪CTGF基因亚克隆到pDsRed-N1载体上成功构建了阅读框架正确的广西巴马小型猪CTGF基因真核表达载体,转染小鼠Hep3B细胞48 h后有红色荧光蛋白表达。广西巴马小型猪CTGF蛋白具有较强的亲水性,其二级结构中α-螺旋、β-折叠、延伸链和无规则卷曲各占13.18%、5.73%、17.48%和63.61%。【结论】广西巴马小型猪CTGF基因在进化过程中的保守性非常稳定,通过构建的真核表达载体能转染小鼠Hep3B细胞并成功表达,可用于生产转基因广西巴马小型猪及研发与CTGF基因有关的疾病模型。

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广西巴马小型猪CTGF基因真核表达载体构建及其相关生物信息学分析

作者:黄叶 吴延军 朱思燃 奉玲丽 瞿秋红 江雨航 夏琴 崔悦悦 莫家远 兰干球

关键词: 广西巴马小型猪; CTGF基因; 小鼠Hep3B细胞; 脂质体转染; 生物信息学;

作者:黄叶吴延军朱思燃奉玲丽瞿秋红江雨航夏琴崔悦悦莫家远兰干球