转基因烟草中外源基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者: 王盛谢芝勋谢丽基谢志勤黄莉罗思思邓显文黄娇玲刘加波

关键词: 转基因烟草双标准曲线法外源基因拷贝数 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR

摘要：[目的]建立SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测转基因烟草中外源基因拷贝数的方法,为转基因植物中外源基因拷贝数的检测提供参考.[方法]采用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法,检测转基因烟草中外源绿色荧光蛋白基因(GFP)的拷贝数,以烟草单拷贝的内源核糖核酸还原酶基因(RNR2)作为内参基因,建立相对定量的双标准曲线法检测转基因烟草中外源基因拷贝数的方法.[结果]构建RNR2基因、GFP基因实时荧光定量PCR的标准曲线,分别为y=-0.2858x+5.6695和y=0.2826x+2.1048,R2分别为0.9994和0.9989,相关性较高.在检测的5株转基因烟草中GFP基因的拷贝数分别为5、8、19、28和45,非转基因烟草植株的GFP基因拷贝数为0.[结论]建立的转基因烟草中外源基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法具有简单、快速、准确等优点,可用于基因工程中对优良转化植株的筛选及外源基因表达量的快速检测和定量分析.

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转基因烟草中外源基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者: 王盛 谢芝勋 谢丽基 谢志勤 黄莉 罗思思 邓显文 黄娇玲 刘加波

关键词: 转基因烟草 双标准曲线法 外源基因 拷贝数 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR

作者: 王盛谢芝勋谢丽基谢志勤黄莉罗思思邓显文黄娇玲刘加波

关键词: 转基因烟草双标准曲线法外源基因拷贝数 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR