家蚕核型多角体病毒LAMP可视化检测技术的建立

作者: 梁湘 [1] 李俊 [2] 陈慧珠 [2] 卓秋红 [2] 龙羽燕 [2] 屈达才 [2]

关键词: 家蚕核型多角体病毒(BmNPV) 家蚕血液型脓病 LAMP 早期诊断可视化

摘要：[目的]建立针对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)的环介导等温扩增(LAMP)可视化检测技术,为生产现场进行家蚕血液型脓病早期诊断提供技术支持.[方法]以BmNPV多角体蛋白基因po如为扩增靶标,分别设计5组内/外引物和5条环引物,根据扩增效率筛选最佳引物组合;优化LAMP反应条件,并进行LAMP检测的特异性、敏感性及临床样本检测试验;使用羟基萘酚蓝(HNB)染色对结果进行比色观察,对简化样品处理的条件进行摸索.[结果]使用环引物后LAMP对BmNPV基因组DNA的最低检测浓度为7fg/μL,检测灵敏度得到有效提高,且反应时间缩短.建立的LAMP检测方法对靶标DNA扩增具有特异性,对样本的检出率高于常规PCR,其最低检测限是常规PCR的100倍.在反应前加入HNB,结果易判断且能减少交叉污染.感染家蚕血淋巴进行100℃煮沸处理后即可直接用于LAMP反应,既简化了操作步骤,又降低了检测成本.[结论]针对BmNPV建立的LAMP可视化检测技术具有灵敏、快捷、可靠的特点,适合用于生产现场的BmNPV感染早期诊断.

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家蚕核型多角体病毒LAMP可视化检测技术的建立

作者: 梁湘 [1] 李俊 [2] 陈慧珠 [2] 卓秋红 [2] 龙羽燕 [2] 屈达才 [2]

关键词: 家蚕核型多角体病毒(BmNPV) 家蚕血液型脓病 LAMP 早期诊断 可视化

关键词: 家蚕核型多角体病毒(BmNPV) 家蚕血液型脓病 LAMP 早期诊断可视化