Trizol试剂法快速高效提取3种作物不同组织总RNA

摘要：【目的】建立适用于禾本科作物不同组织总RNA的快速、高效提取方法，为进行后续的分子生物学研究奠定基础。【方法】采用Trizol试剂法，通过改变抽提上清液吸取量、沉淀方法及沉淀漂洗次数，对甘蔗、玉米和水稻的叶片、茎尖和根尖的总RNA提取方法进行优化。【结果】与吸取0．4mL上清液相比，吸取0．2mL上清液的总RNAOD260／OD280／OD230分别在1．95-2．00和2．11～2．44，所获得的总RNA纯度较高。沉淀漂洗两次的OD260/OD230值（2．11～2．47）明显高于沉淀漂洗1次的，RNAOD260/OD230（1．01～1．61），总RNA纯度较高。经异丙醇沉淀所得的各材料的总RNA28S、18S和5S谱带清晰，无拖尾现象，总RNA完整性较好；LiC1沉淀法的RNA条带较模糊粘连，5S条带明显弥散，总RNA产率相对较低。以Trizol-异丙醇法提取的甘蔗总RNA为模板进行GAPDH基因片段扩增，所获甘蔗的叶片、茎尖和根尖的GAPDH基因表达丰度很强，无特异扩增，目的片段长度为153bp。【结论】改良Trizol-异丙醇法提取甘蔗、玉米和水稻不同组织的总RNA带型清晰、完整性好、纯度和产率高，适用于快速、高效提取禾本科植物不同组织总RNA。