广西砂糖橘黄龙病亚洲种的Nested—PCR检测

摘要：【目的】利用柑橘黄龙病病原亚洲种16S rDNA序列的特异引物检测疑似黄龙病的砂糖橘叶片样品，为砂糖橘黄龙病的综合防控提供理论依据。【方法】选取采自广西9市17个采样点的214份疑似黄龙病及无症状砂糖橘叶片样品，用试剂盒法提取叶脉基因组DNA，采用柑橘黄龙病亚洲种16S rDNA特异引物进行PCR扩增，扩增结果在1%琼脂糖凝胶电泳上检测，统计待检样品柑橘黄龙病病原菌亚洲种的带菌率。【结果】对214份样品的Nested-PCR扩增结果，部分样品可得到1160 bp左右的特异条带，与预期大小相符但条带明暗不同。来自广西9市17个采样点的砂糖橘叶片样品均检测出黄龙病亚洲种病原，平均检出率均在66.0%以上，其中检出率最高的是来自东兴市的样品，检出率为100.0%，检出率最低的是来自南宁市的样品，检出率为66.9%；斑驳、缺素型黄化、叶脉黄化、小叶和无症状叶片样品中均可检测出黄龙病亚洲种。【结论】Nested-PCR技术具有灵敏度高、特异性强的特点，能够快速、准确检测出各种症状样品的黄龙病病原，可用于柑橘黄龙病的早期诊断。