农杆菌介导的AtMYB118基因转化橡胶树易碎胚性愈伤组织体系优化

作者: 毕政鸿 [1] ; 李哲 [2] ; 王志秋 [1] ; 戴雪梅 [2] ; 方家林 [2] ; 黄华孙 [2] ; 林位夫 [2] ; LARDET Ludovic [3] ; MONTORO Pascal [3] ; CARRON Marc-Philippe [3] ; LECLERCQ Julie [3] ; 左建儒 [4] ; 牟金叶 [4] ; 杨晓辉 [4] ; 李响 [5]

关键词: 橡胶树农杆菌介导的遗传转化 AtMYB118基因反转录PCR 易碎胚性愈伤组织转基因植株

摘要：[目的]采用正交设计L25（56）优化农杆菌介导的AtMYB118基因对橡胶树易碎胚性愈伤组织的遗传转化体系,为橡胶树品种遗传改良提供参考.[方法]以75.0 mg/L卡那霉素筛选经过转化的愈伤组织;采用GUS瞬时表达检测方法评价6个因素即预培养时间、农杆菌菌液浓度（OD600）、乙酰丁香酮（AS）浓度、侵染时间、共培养温度和共培养时间对遗传转化的影响.[结果]6个因素显著影响橡胶树长期培养的易碎胚性愈伤组织的转化频率,易碎胚性愈伤组织遗传转化优化条件为：预培养0d,菌液OD600为0.7,侵染时间7 min,共培养时间5d,AS 200 μmol/L,共培养温度25℃.在此优化条件下可获得最高转化频率.经过4～6个月的筛选,获得17个GUS染色阳性的易碎愈伤组织系.经PCR和反转录PCR分析转化愈伤组织,进一步证实uidA、nptⅡ、AtMYB118基因已被整合到愈伤组织基因组中并表达.培养获得1539个胚状体,其中164个为转基因胚状体,转化频率为10.6％;最终获得4株转AtMYB118基因植株.[结论]优化获得可行有效的橡胶树易碎胚性愈伤组织遗传转化体系,可为其品种遗传改良提供技术支持.

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农杆菌介导的AtMYB118基因转化橡胶树易碎胚性愈伤组织体系优化

作者: 毕政鸿 [1] ; 李哲 [2] ; 王志秋 [1] ; 戴雪梅 [2] ; 方家林 [2] ; 黄华孙 [2] ; 林位夫 [2] ; LARDET Ludovic [3] ; MONTORO Pascal [3] ; CARRON Marc-Philippe [3] ; LECLERCQ Julie [3] ; 左建儒 [4] ; 牟金叶 [4] ; 杨晓辉 [4] ; 李响 [5]

关键词: 橡胶树 农杆菌介导的遗传转化 AtMYB118基因 反转录PCR 易碎胚性愈伤组织 转基因植株

关键词: 橡胶树农杆菌介导的遗传转化 AtMYB118基因反转录PCR 易碎胚性愈伤组织转基因植株