大豆RACK1基因RNAi载体构建及植株转化

摘要：【目的】筛选大豆RACK1基因的RNAi突变体，为研究RACK1基因在大豆生长发育过程的调控作用提供依据。【方法】采用RT—PCR克隆大豆叶片RACKl基因核心保守序列片段，以植物表达载体pCAMBIA1301为基本载体，构建抑制大豆RACK1基因表达的RNAi载体。通过农杆菌介导转人大豆子叶节，经潮霉素筛选转基因植株，利用PCR、Southern blot及RT-qPCR进行转基因植株检测。【结果】克隆获得大豆RACK1基因核心保守序列片段432bp；将该基因片段连接到pCAMBIAl301表达载体内含子两侧，通过酶切分析，RNAi载体构建正确。通过农杆菌介导，将该载体转入大豆中黄13号，获得23个转基因大豆株系；经PCR和Southern blot检测，确定大豆RACK1基因RNAi片段已融合到大豆基因组中。经定量RT—qPCR分析，不同转基因大豆株系RACK1基因mRNA的表达量具有明显差异，其在株系5的表达量最高，为对照的68．5％；株系7最低，降至对照的19．9％。【结论】成功构建了大豆RACK1 RNAi表达载体并导人大豆基因组中，获得23个农杆菌介导的RACKlRNA干扰表达的大豆转基因植株，为研究RACK1基因在大豆生长发育过程中的功能和作用奠定了基础。