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橡胶树HbHMGR1基因克隆及其愈伤组织转化

作者: 马晓晓 [1] ; 李哲 [2] ; 戴雪梅 [2] ; 毕政鸿 [1] ; 方家林 [2] ; 黄华孙 [2] ; 李运合 [3] ; 贺永国 [4]

关键词: 橡胶树 HbHMGR1基因 易碎愈伤组织 根癌农杆菌 遗传转化

摘要:[目的]克隆橡胶树HbHMGR1基因,转化橡胶树易碎愈伤组织,为橡胶树遗传转化和品种改良打下基础.[方法]根据已经报道的HbHMGR1基因序列(NCBI登录号X54659.1)设计特异引物,通过RT-PCR克隆HbHMGR1基因,构建pCAMBIA2301-35 S-HbHMGR1植物表达载体.再用EHA105(携带pCAMBIA2301-35 S-HbHMGR1,内含NPTⅡ和uidA基因)侵染橡胶树易碎愈伤组织,数月筛选后对抗性易碎愈伤组织系进行GUS染色和分子检测.[结果]成功克隆了HbHMGR1基因,双酶切重组质粒、重组质粒的PCR扩增结果证明成功地构建了该基因的植物表达载体pCAMBI-A2301-35S-HbHMGR1.侵染后抗性橡胶树易碎胚性愈伤组织GUS检测为蓝色,且分子检测呈现阳性,共获得15个抗性易碎愈伤组织系.[结论]橡胶树HbHMGR1基因在愈伤组织阶段开始表达,有效提高了HbHMGR1基因在橡胶中的表达量.


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