金鱼HSC70和HSP40基因克隆及其原核表达

作者: 金新萍谢倩吕斌曹诣斌

关键词: 金鱼 HSC70基因 HSP40基因克隆原核表达载体

摘要：[目的]克隆金鱼热激同源蛋白70(HSC70)和热休克蛋白(HSP40)基因,构建原核表达载体并通过IPTG诱导表达获得目的蛋白,明确HSC70和HSP40蛋白的生物学功能,为揭示金鱼的高温应答机制打下基础.[方法]提取金鱼鳃组织总RNA,利用RT-PCR扩增金鱼HSC70和HSP40基因,将目的基因片段克隆至线性空表达载体pET-32a上构建原核表达载体pET-32a-HSC70和pET-32a-HSP40,转化大肠杆菌Rosetta表达菌株后用IPTG进行诱导表达,并以SDS-PAGE和Western blotting检测分析表达获得的融合蛋白.[结果]金鱼HSC70基因CDS序列全长1950 bp,编码650个氨基酸;金鱼HSP40基因CDS序列全长996 bp,编码332个氨基酸.金鱼HSC70氨基酸序列与斑马鱼、人类、家鼠、金线鲃和草鱼的相似度分别为96.28%、95.50%、95.35%、98.15%和98.61%;HSP40氨基酸序列与斑马鱼的完全一致(相似度100.00%),与普通鲤鱼、金线鲃、人类和家鼠的相似度均为94.12%.原核诱导表达获得的融合蛋白Trx-HSC70和Trx-HSP40为可溶性表达,其大小约91.5和55.0 kD,均能与Anti-Trx抗体发生特异性反应.[结论]HSC70和HSP40蛋白在鱼类及哺乳动物中高度保守,经原核诱导表达获得的金鱼融合蛋白Trx-HSC70和Trx-HSP40为可溶性表达,且携带有Trx标签,能与Anti-Trx抗体发生特异性反应,可作为互作蛋白用于RNA pull down试验.

上一篇： 无乳链球菌感染吉富品系尼罗罗非鱼的病理学研究
下一篇： 广西巴马小型猪SP1基因克隆测序及其真核表达载体的构建

金鱼HSC70和HSP40基因克隆及其原核表达

作者: 金新萍 谢倩 吕斌 曹诣斌

关键词: 金鱼 HSC70基因 HSP40基因 克隆 原核表达载体

作者: 金新萍谢倩吕斌曹诣斌

关键词: 金鱼 HSC70基因 HSP40基因克隆原核表达载体