少孢节丛孢菌胞外几丁质酶AO-379基因克隆及其表达分析

作者: 钟文强 [1] 孟庆玲 [1] 乔军 [1] 陈英 [1] 贡莎莎 [1] 王熙凤 [1] 黄运福 [1] 才学鹏

关键词: 少孢节丛孢菌几丁质酶AO-379 克隆分子特征原核表达

摘要：[目的]深入了解捕食线虫性真菌几丁质酶的生物学功能,为今后以少孢节丛孢菌重组几丁质酶AO-379研发线虫病生物防控制剂打下基础.[方法]克隆少孢节丛孢菌XJ-A1几丁质酶AO-379基因的全长序列,利用Signal P4.1 Server、InterPro、ExPASy等在线分析软件对其进行生物信息学分析;构建重组表达载体pET32a-AO-379,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后用IPTG进行诱导表达,并以SDS-PAGE和Western blotting检测分析表达获得的融合蛋白.[结果]少孢节丛孢菌几丁质酶AO-379基因全长1475bp,含有1个1203bp的开放阅读框(ORF),编码400个氨基酸.几丁质酶AO-379基因序列与少孢节丛孢菌标准株(ATCC 24927)几丁质酶基因序列的同源性为97.08%,其推导氨基酸的同源性为98.75%.几丁质酶A0-379属于糖苷水解酶18家族,具有SXGG和VDGFDLDFE两个催化区保守序列.其中,SLGGS位于第127~131位,为底物结合位点;VDGFDLDFE位于第173~181位,为水解酶催化活性位点.经大肠杆菌诱导表达获得的融合蛋白AO-379相对分子质量为60.0kD,且能与抗少孢节丛孢菌多克隆抗体发生反应.[结论]少孢节丛孢菌几丁质酶AO-379可在大肠杆菌中成功诱导表达,且获得的融合蛋白AO-379能与抗少孢节丛孢菌多克隆抗体发生反应,可用于研发线虫病生物防控制剂.

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少孢节丛孢菌胞外几丁质酶AO-379基因克隆及其表达分析

作者: 钟文强 [1] 孟庆玲 [1] 乔军 [1] 陈英 [1] 贡莎莎 [1] 王熙凤 [1] 黄运福 [1] 才学鹏

关键词: 少孢节丛孢菌 几丁质酶AO-379 克隆 分子特征 原核表达

关键词: 少孢节丛孢菌几丁质酶AO-379 克隆分子特征原核表达