拮抗木霉gz-2菌株原生质体制备及转化条件优化

作者: 杜婵娟 [1] 付岗 [2] 叶云峰 [3] 杨迪 [2] 张晋 [2] 潘连富 [2] 吴礼和 [4] 王维

关键词: 哈茨木霉 gz-2菌株原生质体绿色荧光蛋白标记技术

摘要：[目的]优化拮抗木霉gz-2菌株原生质体制备及转化条件,快速、高效获得绿色荧光标记菌株,为哈茨木霉及同类真菌的GFP标记提供参考,并为下一步研究其在不同环境中的定殖动态、分布规律及生防特性等打下基础.[方法]采用PEG-CaCl2介导的原生质体转化体系,从木霉菌株的菌龄、酶解时间、转化体系中质粒的含量及再生培养基中潮霉素B(HmB)的浓度等方面对哈茨木霉gz-2菌株原生质体制备及转化条件进行优化,获得表达稳定的转化子,并与出发菌株的生长特性进行比较,评价转化效果.[结果]gz-2菌株培养36 h菌丝所形成的原生质体稳定性最好,菌丝体酶解3.5 h获得的原生质体数量最多,达11.67×106个/mL;每240μL转化体系中质粒DNA含量为40μL,得到的转化子数量最多,为8.67个/皿;再生培养基中HmB含量为600μg/mL时可获得稳定的强转化子.[结论]筛选获得1株表达稳定的转化子GFP-gz-2菌株,该菌株在菌落形态、菌丝生长速率及产孢量上与出发菌株gz-2无显著差异,且具有较好的遗传稳定性.

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拮抗木霉gz-2菌株原生质体制备及转化条件优化

作者: 杜婵娟 [1] 付岗 [2] 叶云峰 [3] 杨迪 [2] 张晋 [2] 潘连富 [2] 吴礼和 [4] 王维

关键词: 哈茨木霉 gz-2菌株 原生质体 绿色荧光蛋白 标记技术

关键词: 哈茨木霉 gz-2菌株原生质体绿色荧光蛋白标记技术