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木薯SCoT-PCR反应体系优化及引物筛选
作者: 严华兵 周慧文 单建伟 谢向誉
关键词: 木薯 SCoT-PCR反应体系 正交试验设计 引物筛选
摘要：【目的】优化木薯SCoT-PCR反应体系并进行SCoT引物筛选，为木薯辅助育种提供技术支持。【方法】以木薯品种新选048为材料，利用正交试验设计对DNA模板量、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶量等因素进行优化，确定木薯最佳SCoT-PCR反应体系，并用其进行SCoT引物筛选。【结果】木薯最佳SCoT-PCR反应体系（20.0μL）：模板DNA 60 ng，引物浓度0.30μmol/L，TaqDNA聚合酶1.5 U，Mg2+1.50 mmol/L，dNTPs 0.25 mmol/L。利用该体系筛选出19条SCoT引物，能稳定扩增出数量多、清晰可辨且多态性丰富的条带。【结论】优化的木薯SCoT-PCR反应体系检测结果稳定，重复性好，且筛选出的19条引物均适用于木薯遗传多样性分析。