水稻GS3蛋白及其与Gβ蛋白复合物的表达及结晶初筛

作者: 罗秋琦曾志雄

关键词: 水稻 GS3蛋白 Gβ蛋白原核表达结晶初筛

摘要：【目的】阐明GS3蛋白在水稻中的调控机制，为解析植物G蛋白的结构及完善G蛋白的调控网络打下基础。【方法】分别采用表达载体pGEX-6p-1和pET-28b-sumo诱导表达GS3蛋白N端结构域OSR和GS3蛋白C端结构域，再使用凝胶过滤柱Superdex 200/7510/300和阴例子交换层析柱Mono Q 5/50纯化表达蛋白，通过筛选优化晶体和X射线衍射的方法对GS3及GS3与Gβ共表达复合物的结构进行研究。【结果】将构建的重组蛋白OSR-pGEX-6p-1与GβN- pET-28b-sumo转入大肠杆菌BL21（DE3）中共表达，经GST beads亲和层析可获得2条条带，分别为OSR-GST（31 kD）和GβN-sumo（26 kD），再过Ni2+ beads亲和层析同样有2条条带，而SDS-PAGE凝胶电泳结果显示有4条条带，分别为GST（26 kD）、sumo（17 kD）、GβN（9 kD）和OSR（5 kD）。经阴例子交换层析柱Mono Q 5/50分离纯化可获得GβN（9 kD）和OSR（5 kD）二者的复合物。将纯化后的复合物浓缩至12 mg/mL进行晶体初筛，但未获得结晶。【结论】GS3和Gβ互作是通过GS3蛋白N端结构域OSR与Gβ N端结构域的结合而实现，其结果符合经典的G蛋白异源三聚体模型。

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水稻GS3蛋白及其与Gβ蛋白复合物的表达及结晶初筛

作者: 罗秋琦 曾志雄

关键词: 水稻 GS3蛋白 Gβ蛋白 原核表达 结晶初筛

作者: 罗秋琦曾志雄

关键词: 水稻 GS3蛋白 Gβ蛋白原核表达结晶初筛